Persönliche Gesundheit

Neue assay beurteilt mehrere zelluläre Signalwege auf einmal

Ein neuartiger technologischer Ansatz entwickelt von Forschern an Baylor-College von Medizin erweitert, von zwei auf sechs, die Anzahl der molekularen Signalwege, die untersucht werden können, die gleichzeitig in einer Zelle Probe mit dem dual-luciferase assay, eine Art von Test-Methode Häufig Verwendung in biomedizinischen Bereichen.

Veröffentlicht in der Zeitschrift Nature Communicationszeigt der Bericht, dass die Multiplex-hextuple luciferase untersuchen, d.h. eine Test-Methode, die effektiv Sonde sechs verschiedene Wege. Es kann auch verwendet werden, zur überwachung der Effekte der experimentellen treatments auf mehrere molekulare Ziele handeln innerhalb dieser Wege. Der neue Test ist empfindlich, spart Zeit und Kosten, wenn im Vergleich zu traditionellen Ansätzen, reduziert den experimentellen Fehler und kann angepasst werden, um alle Forschungs-Feld, in dem das dual-luciferase-assay ist bereits umgesetzt und darüber hinaus.

„Einer von den Interessen unseres Labors ist es, ein besseres Verständnis der Prozesse, die bei Krebs. Krebs entsteht durch Veränderungen auf vielen verschiedenen Genen und Signalwegen, nicht nur eine, und derzeit die meisten Zell-basierte screening-assays Durchführung einzelner Messungen,“ sagte entsprechenden Autor Dr. Koen Venken, assistant professor für Biochemie und Molekularbiologie, Pharmakologie und Chemische Biologie an der Baylor.

Um ein detaillierteres Bild der zellulären Prozesse, die eine Differenzierung normal gegen Krebszellen, die die Forscher resort zur Durchführung von mehreren unabhängigen screening-assays, die auf Kosten von Zeit und zusätzliche Kosten.

„Unser Ziel in dieser Studie war die Messung mehrere zelluläre Signalwege auf einmal in einem einzigen biologischen Probe, welches auch minimieren experimentellen Fehler, die durch die Durchführung mehrerer getrennter assays unter Verwendung von verschiedenen Proben“, sagt Venken, ein McNair Scholar und Mitglied der Dan-L Duncan Comprehensive Cancer Center am Baylor.

Dr. Alejandro Sarrion-Perdigones, der erste Autor des Papiers, mit Schwerpunkt auf der Entwicklung einer Multiplex-Methode—eine Methode zur gleichzeitigen Erkennung von vielen Signalen, die aus komplexen Systemen wie lebenden Zellen. Er entwickelte eine sensible Assays mit luciferases, Enzyme produzieren, die Biolumineszenz. Der Test umfasst sechs luciferases, jeder emittierende Biolumineszenz können unterschieden werden von den anderen. Jede luciferase wurde entwickelt, um die Aktivität von einem bestimmten Weg durch die Emission der Biolumineszenz.

„Zu konstruieren und liefern die luciferase-system, um Zellen, verwendeten wir ein „molekulares Lego“ – Ansatz,“, sagte co-Autor Dr. Lyra Chang, post-Doktorandinnen und Forscher des Center for Drug Discovery an der Baylor. „Diese besteht aus der Verbindung der DNA-Fragmente Kodieren alle biologischen und technischen Informationen, die notwendig sind, um auszudrücken, jede luciferase-gen sequenziell ein einziger DNA-Kette namens vector. Dieser Vektor trägt die Zellen, wo jeder luciferase-Enzym, die separat hergestellt wird.“

Die Behandlung der Zellen mit einer einzelnen multi-luciferase gen-Vektor-anstelle von sechs einzelnen Vektoren, verminderte Variabilität zwischen den biologischen Replikaten, die ein zusätzliches Maß an experimenteller Kontrolle, Chang erklärt. Dieser Ansatz erlaubt gleichzeitige Anzeige der Aktivität von fünf verschiedenen Wege, im Vergleich zu nur einer mit traditionellen Ansätzen, bietet ein viel tieferes Verständnis der zellulären Signalwege von Interesse.